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Les concentrations décrites de riplivirine et cabotegravir après administration intramusculaire dans les essais de Phase 1, 2 et 3 montrent une variabilité interindividuelle importante. Une sous exposition expose au risque d’échec virologique. Notre objectif est de construire le premier modèle de pharmacocinétique de population caractérisant la pharmacocinétique de ces deux molécules après administration intramusculaire. Ces modèles seront utilisés pour l’évaluation des recommandations posologiques actuelles, pour la proposition d’une adaptation éventuelle aux covariables explicatives mises en évidence. La perspective est l’application de ces modèles dans un outil interactif d’adaptation bayésienne partagé par les laboratoires de Pharmacologie de France impliqués dans le STP de ces molécules dans le but d’optimiser l’adaptation issue de ce STP

L’histoire naturelle de l’infection par le virus de l’hépatite B (VHB) est très différente selon l’âge auquel l’infection est contractée. Alors que chez l’adulte l’infection est spontanément résolutive dans la majorité des cas, la contamination materno-infantile ou en bas âge aboutit le plus souvent à une infection chronique. Les traitements actuels ne permettent pas l’éradication de l’ADNccc, la forme de persistance du génome viral, et leur interruption est presque toujours suivie d’une réactivation. De nouvelles thérapeutiques ciblant l’ADNccc sont donc nécessaires pour espérer une cure fonctionnelle chez les patients infectés.

Ce projet s’appuie sur l’existence avérée de liens étroits entre l’infection par le VHB et le métabolisme des acides biliaires (AB). Cette voie métabolique est régulée par un réseau complexe d’hormones, de transporteurs membranaires, de facteurs de transcription et par la flore bactérienne digestive. Le microbiome intestinal métabolise les AB, contrôle leur pool et leur diversité. La synthèse des AB est également régulée par une boucle de rétrocontrôle impliquant l’expression et l’activité de FXR, le récepteur nucléaire des AB, au niveau hépatique et intestinal. NTCP, le principal transporteur des AB, a été identifié comme le récepteur hépatique du VHB. Notre équipe a par ailleurs montré que FXR se fixait sur le promoteur de core du génome du VHB et modulait son activité et des résultats préliminaires utilisant des modèles in vitro indiquent que FXR est un facteur proviral pour le VHB.

Microbiome intestinal et AB évoluent de façon interdépendante au cours des premières années de vie et la perturbation du microbiome modifie l’activité de FXR et le métabolisme des AB. De façon intéressante, il a été observé que l’injection hydrodynamique de VHB dans des souris C3H/HeN entrainait une infection chronique chez les souriceaux et les adultes après traitement antibiotique, mais pas chez les souris adultes non traitées. A partir de ces observations, notre hypothèse est que l’activité de FXR et sa fixation sur l’ADNccc est modulée par le microbiome intestinal avec des conséquences sur l’histoire naturelle de l’infection.

Les principaux objectifs de ce projet sont d’analyser l’influence sur l’infection par le VHB des modulations du métabolisme des AB secondaires à l’évolution du microbiome intestinal, de confirmer le rôle proviral de FXR dans un modèle in vivo et d’explorer les mécanismes à l’origine de cet effet proviral. Des souris infectées par un virus recombinant AAV2/8-VHB seront utilisées. En effet nous avons observé des différences de cinétique de l’infection selon l’âge des souris au cours d’expériences préliminaires, confirmant la pertinence de ce modèle. De plus une diminution significative de la sécrétion d’ADN viral et d’antigène HBs a été observée après traitement par un agoniste de FXR uniquement chez les souris adultes.

Par séquençage de nouvelle génération, la composition du microbiome intestinal sera comparée entre souris jeunes et adultes, traitées ou pas par un agoniste de FXR, et après dysbiose intestinale secondaire à un traitement antibiotique. Pour confirmer le rôle proviral de FXR, les différents marqueurs de l’infection par le VHB seront quantifiés dans des souris FXR+/+ et FXR-/-. Enfin des expériences d’immunoprécipitation de chromatine seront réalisées à partir des foies de souris infectées, ou dans des modèles cellulaires in vitro alternatifs. La fixation sur le génome viral de la protéine virale HBx et de l’histone déacétylase cellulaire SIRT1, en présence ou en absence de FXR, seront notamment étudiées, ces deux protéines interagissant avec FXR et jouant un rôle crucial dans le contrôle de l’activité transcriptionnelle de l’ADNccc.

La mise en évidence d’un lien entre microbiome, métabolisme des AB et infection par le VHB contribuerait grandement à la compréhension de l’histoire naturelle de cette infection. De plus l’identification de FXR comme facteur proviral et la capacité de ligands de FXR à moduler l’activité de l’ADNccc suggèrent que FXR pourrait constituer une cible thérapeutique dans l’objectif d’obtenir une cure fonctionnelle chez les patients infectés par le VHB.

Contexte : Les unités de sang AgHBs positives représentent encore plus de 50 % des poches jetées dans la plupart des banques de sang africaines. Plusieurs études ont montré que les tests infectieux de détermination rapide (TDR) sont efficaces pour réduire le risque d’infections transmissibles par la transfusion (ITT), en particulier lorsqu’ils sont utilisés selon des normes de qualité. Ces tests sont parfois considérés comme une mesure d’économie, en particulier dans les milieux à forte prévalence d’ITT tels que les services de sang africains. Nous n’avons pas trouvé de preuve que le processus de dépistage des infections avant le don (PDS) effectué dans les services de sang africains et utilisant le TDR soit une mesure pratique et économique dans les milieux à forte prévalence d’hépatite virale B comparé au test post-don (PDT). Objectifs : L’étude vise à évaluer le bénéfice clinique et économique du PDS de l’AgHBs en déterminant son acceptabilité opérationnelle, en comparant les prévalences de l’AgHBs dans les unités sanguines pendant le PDS et le PDT, et en calculant le coût du PDS par rapport au PDT. Méthodes : Un essai randomisé de 12 mois dans un service de sang hospitalier au Cameroun sera mené sur 3 000 donneurs de sang consentants qui seront sélectionnés au hasard pour le test de l’AgHBs avant le don ou après le don selon la procédure standard de selection médicale utilisée dans la banque de sang. Les participants seront recrutés parmi les donneurs de sang du Service du Sang du Centre Hospitalier et Universitaire de Yaoundé, lors de leur interview médical. Tous les donneurs de sang seront inclus dans l’étude après avoir fourni un consentement éclairé écrit.  Nous prévoyons d’enregistrer la satisfaction du donneur lors du conseil prédon et/ou de la notification post-don. Un questionnaire sera conçu pour inclure le niveau de satisfaction pendant le test, le conseil et la notification. La durée du processus (en minutes) et l’inconfort du donneur seront mesurés et comparés. La satisfaction du donneur sera notée sur une échelle de type Likert en 4 points : 4 (100 %) pour « entièrement satisfait », 3 (75 %) pour « modérément satisfait », 2 (50 %) pour « peu satisfait », 1 (25 %) pour « pas du tout satisfait». Un réactif préqualifié par l’OMS pour l’AgHBs sera utilisé pour le dépistage avant le don. Pour chaque donneur et don correspondant, le coût de traitement (si transformé en composants), d’incinération (si incinéré) et de stockage (durée de stockage) sera calculé à l’aide du modèle de tarification cumulative, en ajoutant le coût de chacune des variables citées ci-dessus. La charge de travail du personnel sera mesurée en nombre d’heures consacrées à l’accueil et au dépistage d’un participant. Pour chaque donneur de sang réactif au PDS ou au PDT, 5 ml de sang total seront collectés dans un tube EDTA pour des tests de confirmation. La confirmation de l’infection à VHB sur les échantillons réactifs PDS et PDT sera effectuée par l’équipe Nord, selon un algorithme qui integrera le test EIA AgHBs, le AcHBC, le dépistage génomique virale. La prévalence d’AgHBs et la performance de chaque stratégie seront calculés sur la base des résultats de tests de confirmation. Résultats attendus : Sur la base de ce qui a été décrit précédemment, nous nous attendons à ce que le risque infectieux des deux stratégies soit similaire, que le coût du PDS soit inférieur à celui du PDT,  que le score de satisfaction des donneurs de sang et du personnel soit similaire pour les  deux approches. Cette étude peut démontrer que le PDS aide à réduire les dons de sang inutiles et les déchets sanguins tout en améliorant le confort des donneurs de sang lors de la selection médicale. Les résultats seront publiés dans des revues scientifiques, partagés avec le ministère de la santé publique et les associations communautaires impliquées dans la prise en charge des patients ou le don de sang.

La protéine core d’HBV orchestre la formation du virus en s’auto-assemblant en capside et en recrutant l’ARN prégénomique et la polymérase. Nos résultats préliminaires montrent que la co-expression de la protéine core avec différentes protéines core chimériques s’auto assemble dans les cellules et forment des capsides. Nous avons pu déterminer que la partie basique C terminale de la protéine est indispensable à cet assemblage suggérant que les acides nucléiques seraient impliqués dans la formation de la capside virale.

L’objet de ce projet de recherche est de détailler les mécanismes d’auto-assemblage de la protéine core en capside et de déterminer le rôle de cet assemblage dans la reconnaissance du complexe nucléoprotéique Pol-ARN pré-génomique abritant la réplication virale.

Nous proposons, sur la base de travaux de structures publiées et obtenues par RX, de suivre l’effet de mutations de différents domaines de core sur son assemblage en capside virale. L’utilisation de ces mutants et de cellules compétentes pour la réplication d’HBV nous permettra d’observer des modifications structurales lors de la maturation de la capside. Nous avons confirmé que la protéine core interagit avec la protéine Pol. Nous allons donc cartographier cette interaction et déterminer si ce complexe core-pol dépend de l’assemblage de la capside virale. Enfin, nous tenterons de suivre et de localiser la formation du complexe nucléoprotéique core-Pol-ARN pré-génomique.

Ces travaux seront menés par deux laboratoires à Tours et à Rennes reconnus dans leur domaine respectif de virologie et de microscopie. Techniquement, des approches bien rodées seront utilisées (biologie moléculaire, biochimie…) ainsi que des approches plus innovantes. En effet, l’utilisation combinée de l’imagerie optique quantitative et de la résolution de la microscopie électronique sera indispensable pour détailler les étapes initiant la morphogénèse d’HBV. Enfin, nous proposons d’utiliser cette étude pour caractériser le mécanisme d’action des molécules dirigées contre la capside et qui possèdent un fort potentiel antivirale.

L’Organisation mondiale de la santé a appelé à l’élimination de l’hépatite B d’ici 2030. La vaccination universelle à la naissance, lorsqu’elle est mise en œuvre, a montré une grande efficacité pour réduire la prévalence de l’hépatite B chronique. Cependant, des infections par le VHB en absence de symptômes cliniques ont été observées chez des personnes vaccinées et présentant des niveaux détectables d’anticorps dirigés contre l’antigène de surface (anti-HBs) du virus de l’hépatite B (VHB), et pouvant éventuellement conduire à une infection occulte par le VHB caractérisée par la persistance d’un ADNccc viral fonctionnel dans le foie. La prévalence, la physiopathologie, l’évolution à long terme et les facteurs viraux et hôtes associés à ce type d’infections restent largement inconnus. Néanmoins, cet échec immunoprophylactique semble fréquemment associé à des souches de VHB de génotypes/sérotypes différents de celui utilisé dans le vaccin. Cela suggère que la capacité des anticorps induits par le vaccin à neutraliser l’infection peut être réduite par des variations antigéniques spécifiques associées à différents génotypes/sérotypes du VHB. Une étude collaborative internationale sera menée pour estimer la prévalence et les facteurs viraux et immunologiques associés aux infections B chez les donneurs de sang vaccinés. Les donneurs de sang seront utilisés en tant que population sentinelle systématiquement testée pour le VHB en dehors du domaine clinique. Cette étude collaborative impliquera des laboratoires en Europe, Chine, Afrique du Sud et Amérique du Sud afin d’étudier un large éventail de génotypes/sérotypes du VHB dans différents contextes épidémiologiques. Des échantillons de plasma de donneurs vaccinés, anti-HBs positifs, et présentant une infection VHB aiguë ou occulte seront sélectionnés. La diversité génétique du gène S des souches de VHB associées à un échec vaccinal sera étudiée en utilisant un séquençage profond de troisième génération. Les séquences obtenues seront comparées à des séquences contrôles de génotypes équivalents afin d’identifier des mutations susceptibles d’entraîner des modifications structurelles et fonctionnelles des protéines S et un éventuel échappement immunitaire. Les anti-HBs présents dans les plasmas de sujets vaccinés et infectés et de sujets contrôles non-infectés seront purifiés. L’activité neutralisante des anti-HBs contre des variants viraux autologues et hétérologues sera testée dans un essai de neutralisation in vitro en utilisant le virus de l’hépatite D (VHD) portant à sa surface des mutants d’intérêt de la protéine S du VHB. Ces pseudotypes HDV seront produits en culture de lignées cellulaires hépatocytaires. Un test de liaison anticorps-virions sera développé comme substitut pour évaluer la capacité des anticorps présents chez les sujets infectés à se lier à différents variants S autologues et hétérologues. Le suivi des donneurs vaccinés infectés par le VHB permettra de documenter la progression à court et moyen terme de l’infection (autolimitée, chronique ou abortive) en suivant les marqueurs viraux sérologiques et moléculaires dans le plasma et l’évolution génétique du virus. La détermination de la prévalence de l’infection par le VHB chez les donneurs de sang vaccinés en tant que population sentinelle fournira des informations importantes sur l’efficacité à long terme des programmes de vaccination universelle en fonction des génotypes et des variants viraux en circulation. La caractérisation génétique et fonctionnelle de ces variants d’échappement sera utile pour améliorer la conception des vaccins contre le VHB, les protocoles d’immunisation et les futures stratégies immuno-thérapeutiques.